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微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基制備的注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2024-03-26點(diǎn)擊次數(shù):1157

培養(yǎng)基的作用是為微生物提供生長和繁殖所需的營養(yǎng)物質(zhì)和環(huán)境條件。培養(yǎng)基的質(zhì)量直接關(guān)系到檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性,因此對(duì)于微生物檢驗(yàn)而言,培養(yǎng)基的質(zhì)量控制尤為重要。培養(yǎng)基的主要作用有兩方面:①提供微生物生長所需的營養(yǎng)物質(zhì);②培養(yǎng)基具有選擇性和差異性,可以選擇特定類型的細(xì)菌或真菌進(jìn)行培養(yǎng),并區(qū)分不同種類的微生物。因此,在微生物檢驗(yàn)中,必須對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量控制,只有優(yōu)質(zhì)的培養(yǎng)基才能為微生物檢驗(yàn)提供精準(zhǔn)、可靠的檢測(cè)結(jié)果。
培養(yǎng)基的概述
培養(yǎng)基是用于保證微生物繁殖、鑒定、保持活力的物質(zhì),按照物理性質(zhì)可以分成液體培養(yǎng)基、固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和脫水培養(yǎng)基,按照化學(xué)性質(zhì)可以分成天然培養(yǎng)基、組合培養(yǎng)基和半組合培養(yǎng)基,按照功能可以分成選擇性培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基。不同培養(yǎng)基要求不同,保存方式也不同。在受熱、吸潮后,培養(yǎng)基極易被微生物污染或分解變質(zhì),需在避光、防潮、陰涼處儲(chǔ)存。
培養(yǎng)基的采購驗(yàn)收
微生物檢驗(yàn)需使用大量培養(yǎng)基。為提高檢驗(yàn)效率,實(shí)驗(yàn)室多使用商品化即用型培養(yǎng)基、商品化脫水合成培養(yǎng)基。在培養(yǎng)基的采購中,應(yīng)選擇國內(nèi)、外商家的產(chǎn)品,并向生產(chǎn)企業(yè)索要培養(yǎng)基成分名稱、產(chǎn)品編號(hào)、批號(hào)、最終 pH值、儲(chǔ)存條件、生產(chǎn)日期、有效期、質(zhì)控報(bào)告和必要的相關(guān)信息,以保證培養(yǎng)基的質(zhì)量。在產(chǎn)品交貨驗(yàn)收時(shí),購買者需對(duì)產(chǎn)品包裝的完整性、生產(chǎn)日期、有效期和產(chǎn)品合格證明等進(jìn)行核驗(yàn),檢查培養(yǎng)基的顏色、性質(zhì)等是否符合實(shí)驗(yàn)室相關(guān)標(biāo)準(zhǔn),培養(yǎng)基檢驗(yàn)合格后進(jìn)行入庫登記。
培養(yǎng)基的制備
配制要求:正確按要求制備培養(yǎng)基是做好微生物檢驗(yàn)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)人員使用商品化脫水合成培養(yǎng)基配制培養(yǎng)基時(shí),要嚴(yán)格按照產(chǎn)品說明進(jìn)行配制,并做好配制記錄。在配制過程中,實(shí)驗(yàn)人員需要嚴(yán)格遵守相關(guān)操作標(biāo)準(zhǔn),佩戴口罩進(jìn)行操作,避免吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末,稱量、溶解應(yīng)使用專門的角匙,不使用金屬制品,避免金屬離子混入培養(yǎng)基,影響微生物生長;準(zhǔn)確稱量后,應(yīng)先加入適量的水充分溶解,再加水至所需量進(jìn)行加熱,加熱中應(yīng)不斷攪拌,防止培養(yǎng)基在容器底部積聚;調(diào)節(jié)pH值,分裝到比培養(yǎng)基體積最少大 20%的容器中,按說明要求進(jìn)行滅菌。粉末狀態(tài)的培養(yǎng)基開封后應(yīng)存放在陰涼干燥處,及時(shí)使用,環(huán)境濕度過大會(huì)使培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、污染等情況。對(duì)于瓊脂類培養(yǎng)基,可采用沸水浴或流動(dòng)蒸汽的加熱方式進(jìn)行融化,但反復(fù)凍融只允許進(jìn)行1次。
配制用水:水是配制培養(yǎng)基的一部分,一般使用純化水。還應(yīng)定期檢查培養(yǎng)基配制用水的微生物污染情況,應(yīng)符合純化水要求。
滅菌:滅菌能確保培養(yǎng)基質(zhì)量達(dá)標(biāo),實(shí)驗(yàn)室常采用濕熱滅菌法,培養(yǎng)基應(yīng)按照產(chǎn)品使用說明要求進(jìn)行滅菌,每次滅菌需放置壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡,驗(yàn)證滅菌效果。一些培養(yǎng)基可以通過煮沸的方式進(jìn)行滅菌,如結(jié)晶紫中性紅膽鹽瓊脂培養(yǎng)基、亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)將培養(yǎng)基從滅菌鍋中取出,盡快冷卻至所需溫度,防止加熱過度,對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)造成影響;要檢查培養(yǎng)基的pH值、色澤、均勻度等指標(biāo),確保符合要求后貼上標(biāo)簽,標(biāo)明名稱、日期、效期等基本信息。
制備:制備平板時(shí),將滅菌后的培養(yǎng)基傾注于滅菌過的干燥平皿中,在平皿中形成至少3mm的厚度,直徑90mm的平皿通常需要加入18~20mL 的瓊脂培養(yǎng)基,需要保存或培養(yǎng)超過48h的培養(yǎng)基應(yīng)傾注更多培養(yǎng)基 。培養(yǎng)基冷卻凝固后應(yīng)立即使用或儲(chǔ)存,儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)標(biāo)記好培養(yǎng)基名稱及制備日期,密封后放置在2~8℃冰箱中。制備斜面培養(yǎng)基時(shí),應(yīng)先將培養(yǎng)基分裝到試管中,通常每管加入10mL培養(yǎng)基,高壓滅菌,在培養(yǎng)基冷卻凝固前將試管傾斜一定角度放置,待冷卻凝固后方能使用和保存。對(duì)于液體培養(yǎng)基,根據(jù)使用要求直接分裝至三角瓶或試管中,滅菌,冷卻至室溫直接使用或保存。
培養(yǎng)基的儲(chǔ)存
驗(yàn)收入庫的培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按照生產(chǎn)廠家標(biāo)明的儲(chǔ)存條件、保存期限、使用方法保存和使用。開封后的商品化脫水合成培養(yǎng)基要放置在密閉容器中保存,在瓶身注明第一次開封日期 。實(shí)驗(yàn)室自制培養(yǎng)基應(yīng)避光、干燥保存,需冷藏的培養(yǎng)基可放置在2~8℃冰箱中保存,平板保存時(shí)間通常為2~4 周,瓶裝及試管裝培養(yǎng)基保存時(shí)間一般為3~6個(gè)月,具體效期應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。每次使用培養(yǎng)基前,要觀察顏色變化、流動(dòng)性、均勻性、是否結(jié)塊和是否污染等情況。如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基出現(xiàn)受潮、結(jié)塊、其他性狀明顯改變的情況,應(yīng)停止使用。

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